Note! This is an old version of B&C site.
Biopolym. Cell. 2006; 22(2):157-161.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.00072B
Молекулярна та клітинна біотехнології
Іммобілізовані одноланцюгові антитіла для афінного очищення рекомбінантного інтерферону α2b людини
1Гільчук П. В., 1Окунєв О. В., 1Іродов Д. М., 2Павлова М. В., 2Яковенко О. Я.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
  2. Київський національний університет імені Тараса Шевченка
    вул. Володимирська 64, Київ, Україна, 01033

Abstract

Представлено лабораторний метод отримання афінного імуносорбенту для хроматографічного очищення білків, який полягає в орієнтованій і нековалентній іммобілізації рекомбінантних фрагментів антитіл на целюлозному носії. На основі ДНК-послідовностей одноланцюгових антитіл (ScFv) до інтерферону IFN-α2b людини і целюлозозв'язувального домену (CBD) із целюлозолітичного комплексу Clostridium thermocellum сконструйовано злитий білок (ScFv-CBD). Після експресії гена ScFv-CBD в Escherichia coli і виділення цільового білка у функціонально активній формі здійснено його пряму іммобілізацію на мікрогранулярній целюлозі Целюлозу з іммобілізованим ScFv-CBD використано як афінний сорбент для очищення рекомбінантного IFN-α2b людини.
Keywords: одноланцюгові антитіла, імуноафінна хроматографія, іммобілізація білка, злитий білок
Повний текст: (PDF, українською) (PDF, англійською)

References

[1] Moroney S, Pluckhun A. Modern antibody technology: The impact on drug development. Modern Biopharmaceuticals. Weinheim: Wiley VCH, 2005. Vol. 4: 1147-1186.
[2] Holliger P, Hudson PJ. Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nat Biotechnol. 2005;23(9):1126-36.
[3] Huston JS, Levinson D, Mudgett-Hunter M, Tai MS, Novotn? J, Margolies MN, Ridge RJ, Bruccoleri RE, Haber E, Crea R, et al. Protein engineering of antibody binding sites: recovery of specific activity in an anti-digoxin single-chain Fv analogue produced in Escherichia coli. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(16):5879-83.
[4] Pluckthun A, Krebber A, Krebber C, Horn U, Knupfer U, Wenderoth R, Nieba L, Proba K, Riesenberg D. Producing antibodies in Escherichia coli: from PCR to fermentation. Antibody engineering. Eds J. McCafferty, H. R. Hoogen- boom. Oxford: IRL press, 1996: 203-252.
[5] Berry MJ, Davies J, Smith CG, Smith I. Immobilization of Fv antibody fragments on porous silica and their utility in affinity chromatography. J Chromatogr. 1991;587(2):161-9.
[6] Arnold-Schild D, Kleist C, Welschof M, Opelz G, Rammensee HG, Schild H, Terness P. One-step single-chain Fv recombinant antibody-based purification of gp96 for vaccine development. Cancer Res. 2000;60(15):4175-8.
[7] Berdichevsky Y, Lamed R, Frenkel D, Gophna U, Bayer EA, Yaron S, Shoham Y, Benhar I. Matrix-assisted refolding of single-chain Fv- cellulose binding domain fusion proteins. Protein Expr Purif. 1999;17(2):249-59.
[8] Blank K, Lindner P, Diefenbach B, Pl?ckthun A. Self-immobilizing recombinant antibody fragments for immunoaffinity chromatography: generic, parallel, and scalable protein purification. Protein Expr Purif. 2002;24(2):313-22. PubMed
[9] Okunev OV, Gil'chuk PV, Irodov DM, Deriabina EG. Production and characterization of the single chain antibodies against human alpha2b-interferon. Ukr Biokhim Zh. 2005;77(5):106-15.
[10] Recombinant protein handbook: Protein amplification and simple purification. Amersham Parmacia Biotech. 1996 (18-1142-75):108.
[11] Sinacola JR, Robinson AS. Rapid refolding and polishing of single-chain antibodies from Escherichia coli inclusion bodies. Protein Expr Purif. 2002;26(2):301-8.
[12] Morag E, Lapidot A, Govorko D, Lamed R, Wilchek M, Bayer EA, Shoham Y. Expression, purification, and characterization of the cellulose-binding domain of the scaffoldin subunit from the cellulosome of Clostridium thermocellum. Appl Environ Microbiol. 1995;61(5):1980-6.